To investigate PGRMC1-precipitating proteins in human endometrial stromal cells (ESC) to understand its role during in vitro decidualization.
Design
Prospective observational study.
Setting
Academic fertility center.
Patient(s)
Fifteen fertile oocyte donors.
Intervention(s)
Isolated ESCs decidualized in vitro and used in pulldown assays.
Main Outcome Measure(s)
GST-PGRMC1-precipitated proteins identified in nondecidualized ESC (ndESC) and ESC decidualized via a long (8 days) or short (4 days) decidualization protocol (dESC).
Result(s)
Using pulldown assays and mass spectrometry, decidualization was evaluated by prolactin secretion (ELISA) and cytoskeleton morphology (F-actin staining). The protein interactions were validated by colocalization and coimmunoprecipitation. The pulldown and mass spectrometry analysis identified 21, 24, and 24 new significant GST-PGRMC1-precipitated proteins in ndESC, long dESC, and short dESC, respectively, compared with controls. The functional annotation analysis categorized these proteins mainly into endomembrane system and mitochondria cellular components, both related to adenosine triphosphate (ATP) generation and transport activity, protein biosynthesis and posttranslational processing, vesicle trafficking, and protection against oxidative stress activities. Monoamine oxidase B (MAOB) and B-cell receptor-associated protein 31 (BAP31) were identified in dESC from both decidualization protocols. PGRMC1–MAOB/BAP31 interactions were confirmed by immunofluorescence and coimmunoprecipitation in dESC.
Conclusion(s)
Novel GST-PGRMC1-precipitated proteins discovered in ESC suggest that this protein is implicated in deep remodeling of ESC during decidualization and aggregates mainly with proteins involved in biosynthesis, intracellular transport, and mitochondrial activity.
Proteínas precipitadas mediante ensayo pulldown del nuevo receptor no clásico de la progesterona PGRMC1 revela su papel clave en la decidualización
Objetivo
Evaluar las proteínas PGRMC1precipitantes en células endometriales estromales humanas (ESC) para entender su papel durante la decidualización in vitro
Diseño
Estudio observacional prospectivo.
Lugar de realización
Centro de fertilidad académico.
Pacientes
Quince donantes de ovocitos fértiles.
Intervención
Células ESC aisladas decidualizadas in vitro y utilizadas en ensayos de precipitación.
Principal variable de medida
Proteínas PGRMC1 precipitadas mediante GST identificadas en células ESC no decidualizadas (ndESC) y decidualizadas (dESC) mediante protocolo de decidualización largo (8 días) o corto(4 días).
Resultados
Utilizando ensayos “pulldown” de precipitación y espectrometría de masas se evaluó la decidualización mediante secreción de prolactina (ELISA) y morfología del citoesqueleto (tinción F-actina). Las interacciones entre proteínas fueron validadas mediante colocalización y coinmunoprecipitación. Los análisis de precipitación y espectrometría de masas identificaron 21, 24 y 24 proteínas GST-PGRMC1-precipitadas significativas en ndESC, dESC largo y dESC corto, respectivamente, en comparación con los controles. El análisis de anotación funcional clasificó estas proteínas principalmente en componentes celulares del sistema endomembrana y mitocondrias, ambos relacionados con la producción actividad de transporte del adenosin trifosfato (ATP), biosíntesis de proteínas y procesamiento post-traslacional, tráfico de vesículas y protección contra el estrés oxidativo. Monoamina oxidasa B (MAOB) y la proteína 31 asociada del receptor de células B (BAP 31) fueron identificadas en dESC de ambos protocolos de decidualización. Las interacciones PGRMC1-MAOB/BAP31 fueron confirmadas mediante inmunofluorescencia y coinmunoprecipitación en dESC.
Conclusión
Las nuevas proteínas precipitadas GST-PGRMC1 descubiertas en ESC sugieren que esta proteína está implicada en la remodelación profunda de las ESC durante la decidualización y agrega principalmente con proteínas relacionadas con la biosíntesis, transporte intracelular, y actividad mitocondrial.
Key Words
Decidualization
endometrium
PGRMC1
progesterone receptor
Cited by (0)
S.S. has nothing to disclose. R.G.-M. has nothing to disclose. A.Q. has nothing to disclose. A.L.-M. has nothing to disclose. A.P.G.-E. has nothing to disclose. S.P.-D. has nothing to disclose. M.Y.-M. has nothing to disclose. F.D. has nothing to disclose.
Supported by the Spanish Ministry of Economy and competitiveness through the Miguel Servet program granted to F. Dominguez (CPII18/00002 and PI17/00931) and by grant BIO2017-86500-R from Ministerio Español de Economía y Competitividad (MINECO) to M. Yáñez-Mo, co-funded by FEDER. S. Salsano was supported by a Santiago Grisolía Grant from the Generalitat Valenciana. R. Gonzalez-Martin was supported by APOTIP/2018/010 program from the Generalitat Valenciana. S. Pérez-Debén was supported by an FPU14/03136 grant from the Spanish Ministry of Education, Culture, and Sports.
